This invention provides a method of measuring oxidative response of cells
without recourse to preparation of cell culture. The process involves:
1) preparing suspensions of cells from a living host in isotonic solutions,
2) preparing samples of test materials in isotonic solution containing
tagged choline,
3) adding the cells suspension prepared in step 1 to the samples prepared
in step 2,
4) incubating the product of step 3 with shaking for 2-90 minutes,
5) extracting and drying the lipid phase from the product of step 4, and
6) subjecting the product of step 5 to a scintillation counter to measure
choline which has been incorporated into phosphatidylcholine (PC).
An increase in incorporation of choline into PC in the short term indicates
oxidative stress or free radical induced damage. Because the method of the
invention using the cell isolates does not require the expense of cell
culture with concomitant expense and possibility of cell change, it is
particularly useful for clinical evaluation. Furthermore, the ability to
use erythrocytes for study of cellular response to oxidative stress makes
it possible to test individual responses of patient using part of the
blood sample drawn routinely for laboratory use.
Αυτή η εφεύρεση παρέχει μια μέθοδο την οξειδωτική απάντηση των κυττάρων χωρίς προσφυγή στην προετοιμασία της κυτταροκαλλιέργειας. Η διαδικασία περιλαμβάνει: 1) προετοιμάζοντας τις αναστολές των κυττάρων από έναν ζωντανό οικοδεσπότη στις isotonic λύσεις, 2) προετοιμάζοντας τα δείγματα των υλικών δοκιμής στην isotonic λύση που περιέχει την κολλημένη χολίνη, 3) προσθέτοντας την αναστολή κυττάρων που προετοιμάζεται στο βήμα 1 στα δείγματα που προετοιμάζονται στο βήμα 2, 4) επωάζοντας το προϊόν του βήματος 3 με το τίναγμα για 2-90 λεπτά, 5) εξάγοντας και ξεραίνοντας τη φάση λιπιδίων από το προϊόν του βήματος 4, και 6) υποβάλλοντας το προϊόν του βήματος 5 σε ένα σπινθηροβόλημα αντίθετα προς τη χολίνη μέτρου που έχει ενσωματωθεί phosphatidylcholine (PC). Μια αύξηση στην ενσωμάτωση της χολίνης στο PC δείχνει βραχυπρόθεσμα την οξειδωτική πίεση ή την προκληθείσα ζημία ελεύθερων ριζοσπαστών. Επειδή η μέθοδος της εφεύρεσης που χρησιμοποιεί τις απομονώσεις κυττάρων δεν απαιτεί τη δαπάνη της κυτταροκαλλιέργειας με τη συνακόλουθη δαπάνη και τη δυνατότητα της αλλαγής κυττάρων, είναι ιδιαίτερα χρήσιμη για την κλινική αξιολόγηση. Επιπλέον, η δυνατότητα να χρησιμοποιηθούν τα ερυθροκύτταρα για τη μελέτη της κυψελοειδούς απάντησης στην οξειδωτική πίεση το καθιστά πιθανό να εξετάσει τις μεμονωμένες απαντήσεις του υπομονετικού χρησιμοποιώντας μέρους του δείγματος αίματος που σύρεται συνήθως για την εργαστηριακή χρήση.
