A recombinant expression system for the expression of a poly amino acid,
peptide or protein is provided. The poly amino acid of interest is
expressed as a fusion protein that includes an amino acid sequence
recognized and cleaved by a Ulp1 protease. The amino acid sequence joined
to the poly amino acid of interest is preferably from a SUMO (small
ubiquitin-like molecule) protein. This sequence imparts favorable
solubility and refolding properties to the fusion protein. A purification
tag may also be incorporated into the fusion protein for ease of
isolation. The Ulp1 protease used to cleave the fusion protein may be the
Ulp1 protease or the active Ulp1 protease fragment, Ulp1(403-621). The
Ulp1 protease rapidly and specifically cleaves the fusion proteins of the
invention at the Ulp1 cleavage site. The amino acid sequence recognized by
a Ulp1 protease is cleaved asymetrically to leave only an N-terminal
serine joined to the poly amino acid of interest. This recombinant
expression system is particularly advantageous for expression and rapid
and highly specific cleavage and purification of poly amino acids that
have low solubilities or are difficult to express in other systems.
Un sistema recombinant de la expresión para la expresión de un aminoácido, de un peptide o de una proteína poly se proporciona. El aminoácido poly del interés se expresa como proteína de la fusión que incluya una secuencia del aminoácido reconocida y hendida por un protease Ulp1. La secuencia del aminoácido unida al aminoácido poly del interés es preferiblemente de una proteína del SUMO (pequeño ubiquitin-como la molécula). Esta secuencia imparte solubilidad favorable y características refolding a la proteína de la fusión. Una etiqueta de la purificación se puede también incorporar en la proteína de la fusión para la facilidad del aislamiento. El protease Ulp1 usado para hender la proteína de la fusión puede ser el protease Ulp1 o el fragmento activo del protease Ulp1, Ulp1(403-621). El protease Ulp1 rápidamente e hiende específicamente las proteínas de la fusión de la invención en el sitio de la hendidura Ulp1. La secuencia del aminoácido reconocida por un protease Ulp1 se hiende asymetrically para dejar solamente un serine del N-terminal ensamblado al aminoácido poly del interés. Este sistema recombinant de la expresión es particularmente ventajoso para la expresión y hendidura y purificación rápidas y altamente específicas de los aminoácidos poly que tienen solubilidades bajas o es difícil de expresar en otros sistemas.
