The present invention relates to a method for screening chemically modified
mutant enzymes for amidase and/or esterase activity. This method includes
providing a chemically modified mutant enzyme with one or more amino acid
residues from an enzyme being replaced by cysteine residues, where at
least some of the cysteine residues are modified by replacing thiol
hydrogen in the cysteine residues with a thiol side chain, contacting the
chemically modified mutant enzyme with a substrate for an amidase and/or a
substrate for an esterase, and determining whether the chemically modified
mutant enzyme exhibits amidase and/or esterase activity. The present
invention also relates to chemically modified mutant enzymes and a method
of producing them where one or more amino acid residues from an enzyme are
replaced by cysteine residues, and the cysteine residues are modified by
replacing at least some of the thiol hydrogen in the cysteine residue with
a thiol side chain to form the chemically modified mutant enzyme. The
thiol side chain is selected from the group consisting of --SCH.sub.2
(p-CH.sub.3 --C.sub.6 H.sub.4), --SCH.sub.2 (p-OCH.sub.3 --C.sub.6
H.sub.4), --SCH.sub.2 (p-CF.sub.3 --C.sub.6 H.sub.4), and --SCH.sub.2
(2,4-diNO.sub.2 --C.sub.6 H.sub.3).
A invenção atual relaciona-se a um método para selecionar enzymes quimicamente modificados do mutant para a atividade do amidase e/ou do esterase. Este método inclui fornecer um enzyme quimicamente modificado do mutant com um ou mais resíduo do amino-ácido de um enzyme que está sendo substituído pelos resíduos do cysteine, onde ao menos alguns dos resíduos do cysteine são modificados substituindo o hidrogênio do thiol nos resíduos do cysteine com uma corrente lateral do thiol, contatando o enzyme quimicamente modificado do mutant com uma carcaça para um amidase e/ou uma carcaça para um esterase, e determinando se o enzyme quimicamente modificado do mutant exibe a atividade do amidase e/ou do esterase. A invenção atual relaciona-se também aos enzymes quimicamente modificados do mutant e a um método de produzi-los onde um ou os mais resíduo do amino-ácido de um enzyme é substituído por resíduos do cysteine, e os resíduos do cysteine são modificados substituindo ao menos algum do hidrogênio do thiol no resíduo do cysteine com uma corrente lateral do thiol para dar forma ao enzyme quimicamente modificado do mutant. A corrente lateral do thiol é selecionada do grupo -- SCH.sub.2 (p-CH.sub.3 -- C.sub.6 consistindo H.sub.4), -- SCH.sub.2 (p-OCH.sub.3 -- C.sub.6 H.sub.4), -- SCH.sub.2 (p-CF.sub.3 -- C.sub.6 H.sub.4), e -- SCH.sub.2 (2,4-diNO.sub.2 -- C.sub.6 H.sub.3).
